Page 6 - Henry Laboratorio de Diagnóstico Clínico Tomo 2

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CAPÍTULO 28 • PLAQUETAS EN SANGRE 587
las características de la circulación venosa, las plaquetas se pueden unir El examen inicial de laboratorio de las plaquetas incluye un recuento pla-
directamente al colágeno expuesto. En condiciones más privativas presentes quetario. Esta medida se ha convertido actualmente en un componente de
en la circulación arterial, se cree que la adhesión se inicia a través del vWF rutina del recuento total de sangre (CBC) en la era de la instrumentación para
circulante unido al colágeno subendotelial expuesto y el vWF unido a la el recuento electrónico de partículas. Muchos analizadores proporcionan adi-
superficie se une entonces a las plaquetas por la vía del complejo receptor cionalmente el valor del volumen plaquetario medio (MPV) y pueden mostrar
de plaquetas GP Ib/IX/V (Figura 28-3). Para conseguir la formación de un un histograma de los volúmenes plaquetarios. En individuos sanos, el MPV
tapón de plaquetas estable, se requiere también GP IIb/IIIa. El fibrinógeno varía inversamente con el recuento de plaquetas, por tanto, es mejor hacer la
funciona como el mayor ligando adherente para GP IIb/IIIa y esta facultad lo interpretación de los valores de MPV como anormalmente altos o bajos con
convierte en un componente esencial en la agregación plaquetaria. In vivo, la referencia del recuento de plaquetas del paciente (Bessman, 1981, 1986).
los agregados de plaquetas que se desarrollan dentro de los vasos se deno- Recientemente, los instrumentos automatizados han iniciado adicionalmente
minan trombos. una aproximación a la medida de la madurez plaquetaria, como reflejo de su
Además de los cambios altamente significativos en la conformación del contenido en ácido ribonucleico (ARN) (análogo a la medida de reticulocitos
complejo GP IIb/IIIa de la membrana de las plaquetas que ocurren como en la serie eritroide). Estas medidas ofrecen la posibilidad de detectar una
resultado de la activación plaquetaria, también tiene lugar una importante respuesta trombopoyética de la médula uno o varios días antes de lo que se
translocación de la selectina P desde su sitio de almacenamiento intracelular pueda detectar por los métodos tradicionales. La evaluación de la extensión
α-granular a la superficie exterior de la membrana de la plaqueta. El signifi- en sangre periférica puede permitir al menos una verificación preliminar de la
cado biológico de este suceso está siendo todavía dilucidado, pero ya parece medida del recuento y de la distribución del tamaño plaquetario. Debido a que
ser de gran alcance. La expresión de la glucoproteína selectina P ligando-1 las plaquetas pueden sufrir diferentes grados de activación y la subsiguiente
(PSGL-1) por neutrófilos, monocitos, células endoteliales dañadas, así como diseminación en la preparación de la extensión de sangre periférica, el tama-
una variedad de otras células que se expresan en ciertos estados patológicos ño aparente de distribución de las plaquetas en la extensión puede, en algu-
(Evangelista, 1999) proporcionan un medio para la adhesión por estas célu- nos casos, desviarse significativamente de la distribución real de volúmenes.
las de las plaquetas. El análisis de la expresión de la selectina P de las pla- En casos de trombocitopenia grave por debajo de la linealidad establecida por
quetas puede incrementar su importancia no sólo en el contexto del estudio un autoanalizador determinado, o cuando los fragmentos celulares pueden
de la hemostasia, sino también en el de la inflamación y otras respuestas estar falseando el recuento automático, se puede hacer un recuento manual
patológicas. por contraste de fases en una cámara hemocitométrica (Brecher, 1950). Sin

Peso molecular x 10 –3

Figura 28-2. Análisis de las proteínas de plaquetas y los anticuerpos antiplaquetarios mediante electroforesis en gel SDS-poliacrilamida e inmuno-
transferencia. Esta figura es una reproducción artística del material original, que permite una presentación más clara y consistente del análisis clá-
sico. Las proteínas solubles de las plaquetas fueron separadas por electroforesis en un gel que contenía un gradiente de poliacrilamida desde un
7% a un 12%. Excepto en la línea 9 en que las proteínas se redujeron con un 5% de β-mercaptoetanol, el resto de las muestras eran no reduci-
das. Las ordenadas marcan la posición de las principales glucoproteínas de la membrana plaquetaria en la forma no reducida; por lo tanto, esta
notación no es aplicable a la línea 9. La línea 1 representa una tinción con la proteína azul brillante de Coomasie de todas las plaquetas normales.
Entre las principales glucoproteínas de membrana, sólo GP IIb es separada de otros polipéptidos y presentada como una banda distinta. De las
líneas 2 a la 4 se representan autorradiografías de las proteínas de superficie de las plaquetas marcadas por radioiodinación catalizada por lacto-
peroxidasa, y las líneas 5 a la 7 representan fluorografías de plaquetas marcadas por tratamiento secuencial con neuraminidasa, galactosa oxida-
3
sa y sodio [ H] borohidrato (para marcar los carbohidratos de la superficie celular). De las líneas 2 a la 5 se representan plaquetas normales. Líneas
3 y 6 representan plaquetas de un paciente con el síndrome Bernard-Soulier. La ausencia de GP Ib puede verse con ambas técnicas, mientras que
la ausencia aparente de GP V, GP IX, y una banda de elevado peso molecular que puede contener complejos de GP Ib sólo puede verse en la
línea 6. Las líneas 4 y 7 representan plaquetas de un paciente con trombastenia de Glanzmann, demostrando su deficiencia de GP IIb y GP IIIa.
Las líneas 8 y 9 son transferencia western de las proteínas de plaquetas no reducidas (línea 8) y reducidas (línea 9) utilizando como anticuerpo pri-
mario una mezcla de antisuero policlonal de conejo anti-GP IIb y anti-GP IIIa. La reducción de los puentes disulfuro produce la disociación de GP
IIb en dos subunidades: GP IIbα, con una migración ligeramente más rápida que GP IIb, y GP IIbβ, que puede verse en la posición de Pm = 22.000.
La glucoproteína IIIa es aparentemente rica en puentes disulfuro intramoleculares y muestra un mayor tamaño y menor migración electroforética
después de la reducción. (De Nurden AT, George JN, Phillips DR: Platelet membrane glycoproteins: Their structure, function, and modification in
disease. In Phillips DR, Shuman MA [eds]: Biochemistry of Platelets. Orlando, FL, Academic Press, 1996, con autorización.)